Синдром снижения яйценоскости-76 (ССЯ-76) - вирусная болезнь, характеризующаяся поражением половой системы кур, снижением яичной продуктивности, ухудшением качества яиц.
Ущерб от ССЯ-76 обусловлен недополучением в среднем на курицу-несушку до 10-30 яиц (от племенных кур выбраковывается в среднем до 50 яиц), снесением бесскорлупных яиц, яиц с кровяным кольцом, снижением выводимости цыплят и низкой их жизнеспособностью до двухнедельного возраста.
Этиология . Возбудитель заболевания вирус из рода Aviadenovirus, семейства Adenoviriclae, по некоторым физико-химическим и биологическим свойствам идентифицированный как аденовирус уток. Вирион обладает кубическим типом симметрии, лишен суперкапсидной оболочки, имеет величину 80 нм в диаметре, содержит 6 капсомеров на грани. На вершинах икосаэдра могут выявляться булавовидные утолщения. Считается, что они являются носителями поверхностного антигена вируса - гемагглютинина. Геном вируса сформирован ДНК. Молекулярная масса вируса равна 170-175 мегадальтон, константа седиментации 560, плавучая плотность в градиенте хлорида цезия составляет 1,32-1,35 г/см 3 . Вирус устойчив к эфиру, хлороформу, действию температурных факторов. При нагревании вируссодержащего материала до 56°С в течение 30 минут инфекционная активность снижается не более чем на 50%. Нагревание до 70°С вызывает потерю инфекционной и гемагглютинирующей активности через 10 минут. В замороженном состоянии при -25°С вирус сохраняет жизнеспособность более 3 лет. Вирус относительно стабилен при рН среды 6,0-9,0. В 50% глицерине при температуре -30 -50°С вирус, содержащийся в патологическом материале, сохраняется в активном состоянии в течение нескольких лет. Хорошо вирус хранится в лиофилизированном состоянии. Ведущим местом локализации вируса в организме птиц являются органы половой системы, но в период латентной инфекции он может персистировать в кишечнике и других органах. Вирус можно выделить из яйцевода, лейкоцитов
крови, верхних дыхательных путей, носовой и фаренгиальной слизи, печени, содержимого клоаки больных кур в течение 3-5 дней с момента появления первых клинических признаков заболевания. Во внутренних органах и тканях экспериментально зараженных птиц вирус сохраняется до 5 недель. В фекалиях его можно обнаружить в течение 2 недель после заражения. Антигенных вариантов и типов у вируса ССЯ-76 не установлено. У больных кур на 6-8 день после заражения продуцируются сывороточные антитела, обладающие вируснейтрализующими, антигемагглютинирующими и прецишгтирующими свойствами. В динамике выработки антител имеется два пика. Первый (JgM-пик) выявляется на 10-11 день, второй (JgG-пик) - на 16-18 день после заражения. Нейтрализующие антитела начинают образовываться на шестые сутки после заражения, с возрастанием титра до 28 дня. Преципитирующие антитела также образуются с 6 дня после заражения, но с 17 дня их титр начинает снижаться. Цыплята, полученные от серопозитивных родителей, до 4-недельного возраста содержат материнские антитела, с периодом полураспада 3 дня. Но они не могут постоянно предохранять птицу от аденовирусов, передаваемых потомству вертикально и начинающих себя проявлять в стрессовых ситуациях, в том числе в период выхода на пик яйцекладки. Вирус ССЯ-76 не принадлежит ни к одному из 12 известных в настоящее время серотипов аденовирусов птиц и в отличие от них способен агглютинировать эритроциты кур, уток, индеек, гусей.
Эпизоотология . К заболеванию восприимчивы куры-несушки всех пород с максимальным проявлением болезни в период максимальной яйценоскости (180-140 дней), но возможно возникновение болезни в любой период продуктивного цикла. Более восприимчивы к заболеванию куры высокопродуктивных мясо-яичных и яичных кроссов. Вирус ССЯ-76 широко распространен среди домашних и диких уток, а также гусей, является для них апатогенным и не вызывает клинического проявления болезни. Персистенция возбудителя обычно подтверждается ретроспективно по наличию специфических антител, но во многих случаях от уток и гусей удается выделить вирус. После экспериментального заражения гусят вирусом ССЯ-76 возбудителя можно выделить из фекалий инфицированных птиц в течение 3 недель, что дает основание считать гусей потенциальным источником инфекции. Антитела к вирусу ССЯ-76 можно обнаружить в сыворотке крови диких гусей, цапель, воробьев, лебедей, сов, аистов, однако сведения о клиническом проявлении заболевания среди данных видов птиц не имеются. Ведущий путь распространения возбудителя - трансовариальный. Особенно интенсивно инфицируются яйца в период виремии, которая по времени совпадает со спадом яйценоскости. Не исключена передача возбудителя со спермой петухов. Горизонтальное распространение возбудителя отмечается на начальной стадии болезни и наиболее выражено при напольном содержании птицы. В этот период вирус интенсивно выделяется с фекалиями, фарингиальной и трахеальной слизью, загрязняет корма, окружающую среду, что способствует перезаражению стада за счет поедания инфицированного корма и помета. Эпизоотологической особенностью болезни у некоторых кроссов кур является неодинаковая степень проявления инфекции в различных птичниках неблагополучного по ССЯ-76 хозяйства. Кроме того, отмечены случаи, когда в одном и том же птичнике, наряду с пораженной птицей, оставалось значительное количество кур-несушек, сохраняющих нормальную яйценоскость в течение всего продуктивного периода.
Клинические признаки . Характерных симптомов заболевания нет. Возможна диарея, некоторое угнетение, снижение поедаемости корма. В пик заболевания - ослабленное дыхание, жидкий зеленоватого оттенка помет, отмечающийся в течение 1-2 недель. На поздних стадиях болезни встречается синюшность сережек и гребня. Смертность птиц при ССЯ-76, даже в пик острой формы болезни, незначительная.
В редких случаях среди взрослых несушек она может достигать 3-5%, преимущественно за счет желточного перитонита и клоацита. Ведущим признаком болезни является снижение яичной продуктивности на 15-30%, а в отдельных стадах на 50% и более. Снижение яйценоскости протекает в определенной закономерности: весь период спада составляет 6-7 недель, из них 4-5 недель приходится непосредственно на спад, а 2-3 последующих - на восстановительный период. При клеточном содержании продуктивность кур восстанавливается почти полностью или остается на 1-3% ниже нормативной, а при напольном содержании, как правило, на 7-10% меньше яйценоскости, предшествовавшей спаду. В процессе переболевания ССЯ-76 птица в течение 6-8 недель несет бесскорлупные («литье яиц») или депигментированные яйца с истонченной скорлупой, с кольцевыми или полосчатыми, шероховатыми образованиями на поверхности. Значительно увеличивается количество «мраморного» яйца, возрастает процент боя и насечки яиц. Ухудшаются инкубационные качества яйца, при этом снижаются их оплодотворяемость, выводимость и жизнеспособность цыплят в течение первых двух недель жизни. Изменение качества скорлупы и так называемое «жировое яйцо», наиболее часто встречается у несушек цветных кроссов и у бройлеров. У кур белых кроссов изменена, в основном, белковая часть яйца в виде его локального разжижения.
Патоморфология . Патологоанатомические изменения о внутренних органах птиц при ССЯ-76 выражены крайне слабо. При острой форме в отдельных случаях в яичнике отмечают изменения атрофического характера, уменьшение количества и размеров фолликулов, гиперемию или кровоизлияния в соединительнотканной капсуле фолликулов, их деформацию и дегенерацию. Встречаются участки яичника с полностью дегенерировавшими фолликулами и превращенными в некротизированную массу желтовато-коричневого цвета. Возможно появление кист. Яйцевод, как правило, короче и тоньше, чем у здоровых птиц. Выявляется гиперемия и точечные кровоизлияния в слизистой оболочке, ее отечность, наиболее выраженные в маточном отделе яйцевода, реже во влагалищном и белковом отделах. В некоторых случаях отмечаются желточные перитониты. Печень иногда увеличена в размере, имеет дряблую консистенцию и желтоватый цвет. Одновременно отмечается увеличение желчного пузыря, переполнение его водянистой желчью, светло-зеленого цвета. Сведения о поражении вирусом ССЯ-76 лимфоидных органов птиц противоречивы.
Диагностика . Диагноз ставится на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований, в число которых входят: выделение вируса на утиных эмбрионах, культуре клеток фибробластов утиных эмбрионов или культуре клеток ткани печени утиных или куриных эмбрионов с последующей идентификацией возбудителя в РГА, РЗГА, МФА, ИФА, постановка биопробы на курах; определение специфических антител в сыворотке крови или желтках яиц кур-несушек в РЗГА или ИФА; гистологическое исследование органов репродуктивного тракта.
Для вирусологического исследования используют пробы яичника с фолликулами, яйцевода, прямой кишки с содержимым, клоачные смывы, кровь с антикоагулянтом (гепарином или 1% раствором цитрата натрия). Отбор проб патматериала проводится в первые 3-5 дней после начала болезни и не позднее, чем через 2 часа после клинической смерти или убоя птицы. Кусочки органов размером 1-1,5 см помещают в пробирку или флакон с 5,0-8,0 мл физиологического раствора или раствора Хенкса, содержащих 1000 ЕД пенициллина, 1000 мкг стрептомицина и 50 нистатина на 1 мл. В качестве стабилизатора в раствор целесообразно добавлять 0,5-1% альбумина бычьей сыворотки или 0,5% желатина, предотвращающих инактивацию вируса. Клоачные смывы берут стерильным ватным тампоном и погружают их в физиологический раствор, содержащий вышеперечисленные добавки. Кровь обычно берут из плечевой (подкрыльцовой) вены, яремной вены или методом пункции из сердца. Для последующих исследований из цельной крови выделяют лейкоцитарную фракцию. При этом от каждой птицы, до кормления берут 10-15 мл крови, добавляют к ней несколько капель гепарина или цитрата натрия, центрифугируют при 1000 об./мин. в течение 30 мин и затем пипеткой отсасывают лейкоцитарную пленку. Полученные лейкоциты переносят в стерильный физиологический раствор, куда добавляют из расчета 100 ЕД пенициллина, 100 мкг стрептомицина на 1 мл раствора и подвергают нескольким циклам замораживания и оттаивания для разрушения клеток. Суспензию полуразрушенных лейкоцитов используют для изоляции вируса. Перед началом процедуры выделения вируса патологический материал следует освободить от консерванта, что достигается многократным промыванием проб свежими порциями стерильного физиологического раствора с содержанием 0,15 моль/л хлорида натрия и рН 7,0-7,2. Затем кусочки яйцевода или кишечника с содержимым измельчают и растирают в ступке со стерильным кварцевым стеклом или в гомогенизаторе. Из измельченного материала готовят 10% суспензию на фосфатном буферном растворе и центрифугируют при 1500-2000 об./мин. в течение 30 мин. Надосадоч- ную жидкость отсасывают пипеткой, переносят в стерильные флаконы и добавляют к ней по 200 ЕД пенициллина, 100 мкг стрептомицина и 20 ЕД нистатина на 1 мл. Экспозиция воздействия антибиотиков 45-60 мин при комнатной температуре. В целях контроля стерильности полученного материала делают высев на МПБ, МПА, среду Китт-Тароцци и среду Сабуро, с последующим инкубированием посевов в течение 10 суток при температуре 37°С (а среды Сабуро - при температуре 20-22°С).
Для серологического исследования направляют сыворотку крови от птиц в возрасте 1-120, 160-180, 220-140, 300 дней и от птиц, вышедших из эксплуатации по возрасту, а также от кур с наличием клинических признаков болезни (по 20-15 проб от каждой группы). Пробы крови в объеме 3,0-4,0 мл собирают в отдельные пробирки, предварительно увлажненные стерильным физиологическим раствором, затем помещают в термостат с температурой 37°С на 20-30 мин. Образовавшийся сгусток обводят металлической спицей или стеклянной палочкой и выдерживают в холодильнике при 4-6°С в течение не менее 3-4 часов. Отстоявшуюся сыворотку сливают в чистые занумерованные пробирки и укупоривают резиновыми пробками. Перед использованием в работе сыворотку прогревают в водяной бане при температуре 56°С в течение 30 мин. для инактивации термолабильных ингибиторов.
При направлении для исследования яиц от подозреваемых в заболевании птиц целесообразно отбирать некондиционные яйца (декальцинированные, депигментированные). Для приготовления экстрактов берут 1,5 мл желтка и суспензируют его в пробирке с 6,0 мл физиологического раствора с рН 7,2-7,4. Затем в пробирки вносят по 2,0 мл дихлорэтилена (хлороформа) и 1,0 мл эфира, закрывают резиновыми пробками, смесь интенсивно перемешивают встряхиванием, прогревают в течение 1 часа при температуре 37°С, периодически встряхивая и центрифугируют 15 мин. при 2000 об/мин. Полученная в пробирках прозрачная, слегка опалесцирующая надосадочная жидкость и является экстрактом желтка в исходном разведении 1:5, которая используется в качестве исследуемого материала.
Для выделения вируса используют утиные эмбрионы 10-12-суточной инкубации, не содержащие антител к вирусу ССЯ-76. Перед заражением эмбрионы овоскопируют и отбирают пригодные для работы, подвижные, с хорошо развитой сосудистой системой. Для заражения в скорлупе после ее дезинфекции пробивают два отверстия: одно в центре пуги, другое - на боковой поверхности яйца на 2-3 мм ниже границы пуги в предварительно отмеченном бессосудистом пространстве. Через боковое отверстие в аллантоисную полость вводят приготовленную суспензию исследуемого материала в объеме 0,2 мл в каждый эмбрион. При этом каждой пробой материала заражают не менее 4-5 эмбрионов. После заражения отверстие в скорлупе заливают парафином - первоначально боковое, затем верхнее. Зараженные и контрольные эмбрионы инкубируют при температуре 37°С в течение 96-120 часов. В процессе инкубации эмбрионы овоскопируют один раз в сутки через 24 часа. Эмбрионы, погибшие в последующие сроки, и оставшиеся живыми на шестые сутки после заражения, охлаждают при температуре 4-6°С в течение 13-18 часов и вскрывают. От каждого из вскрытых эмбрионов собирают экстраэмбриональную жидкость, добавляют антибиотики из расчета 200 ЕД пенициллина, 200 мкг стрептомицина и 20 ЕД нистатина на 1 мл и после контакта проводят второй пассаж исследуемого материала на развивающихся эмбрионах в той же последовательности. Затем проводят третий пассаж. Экстраэмбриональную жидкость, собранную от эмбрионов третьего пассажа, исследуют в РГА и РЗГА для индикации и идентификации гемагглютинируюшего вируса ССЯ-76. Интенсивное накопление вирусного гемагглютинина в органах и тканях эмбрионов начинается на 2-3 сутки после заражения. К 5-6 суткам титр вируса достигает максимальных значений, в отдельных случаях 15-16 log ГАЕ/02 мл. При этом гибель эмбрионов, как результат действия вируса, происходит довольно редко (1-2%). Вирус можно культивировать на развивающихся эмбрионах кур, однако его накопление при этом происходит менее интенсивно, независимо от количества адаптивных пассажей. Дополнительно репродукцию вируса в зараженных утиных эмбрионах в ходе последовательных пассажей контролируют по характеру развившихся патологоанатомических изменений в органах и тканях. Отмечается отставание эмбрионов в росте и развитии, гиперемия и отек кожи в области головы и шеи, точечные кровоизлияния на коже и в подкожной клетчатке, помутнение ХАО, незначительное увеличение печени и почек.
Вирус также культивируют на различных культурах клеток и суспензий эксплантатов органов и тканей птиц. Чаще применяются культуры фибробластов утиных эмбрионов и культуры клеток печени и почек эмбрионов кур. Используют 24-48-часовую культуру первично трипсинизированных утиных фибробластов, приготовленную общепринятым методом и выращенную в стеклянных флаконах (матрасах) или пробирках. Исследуемый материал дополнительно разводят на физиологическом растворе до 10-1 и 10-3 и затем каждым разведением материала в объеме 3 мл заражают по 3 флакона с монослоем. Зараженные и контрольные флаконы инкубируют при 37-38°С. Для учета цитопатического действия флаконы просматривают под малым увеличением микроскопа через каждые 24 часа в течение 7 дней.
Первые цитопатические изменения проявляются через 36-48 часов после инфицирования культур и характеризуются утолщением клеточных мембран, увеличением и округлением самих клеток. Через 96 часов после заражения монослой разрушается, много погибших клеток плавает в культуральной среде, при этом некоторые из них соединяются длинными отростками. При окрашивании культур гематоксилином и эозином в них видны крупные гранулированные базофильные внутриядерные включения, сливающиеся в неоформленные скопления базофильной массы. Обнаруживается большое количество гигантских многоядерных клеток, в которых содержится по 8-10 частично разрушенных ядер. Последние формируют вакуоли с остатками ядерного вещества. В цитоплазме отдельных клеток наблюдают образование вакуолей и эозинофильной зернистости. Вирус ССЯ-76 накапливается в культуральной жидкости, поэтому для получения в ней более высокой концентрации вирусных частиц инфицированные клеточные культуры на заключительных этапах накопления вируса подвергают трехкратному последовательному замораживанию и оттаиванию, используя полученную суспензию в дальнейших исследованиях при индикации гемагглютинирующего вируса ССЯ-76.
Для индикации и идентификации вируса наиболее часто применяют РГА, РЗГА, а также МФА, ИФА, ПЦР.
Ведущим методом индикации вируса в развивающихся эмбрионах или культурах клеток считается выявление в экстраэмбриональной или культуральной жидкости вирусного гемагглютинина в РГА с 1% суспензией эритроцитов кур. Первоначально ставят ориентировочную РГА на стекле или в чашках Петри с 1% взвесью эритроцитов на физиологическом растворе. На хорошо промытую и обезжиренную поверхность стекла наносят каплю взвеси эритроцитов и каплю вируссодержащего материала, перемешивают и наблюдают за появлением хлопьев агглютинированных эритроцитов. Положительная РГА появляется в течение 3-5 минут и характеризуется образованием хлопьев агглютинированных эритроцитов. Результаты положительной РГА в предварительном опыте подтверждают путем постановки развернутой (классической) реакции. При этом в каждую пробирку или лунку планшета вносят по 0,2 мл стерильного физиологического раствора, после чего в первую пробирку или лунку вносят 0,2 мл испытуемой экстраэмбриональной или культуральной жидкости, перемешивают с помощью пипетки. Переносят 0,2 мл жидкости в следующую пробирку или лунку. Таким образом готовят последовательные двукратные разведения испытуемого материала от 1:2 до 1:4096 и более. Из последней пробирки или лунки планшета 0,2 мл материала удаляют в дезраствор. Затем в каждую пробирку или лунку с разведениями добавляют по 0,2 мл 1% суспензии эритроцитов, штатив с пробирками или планшет встряхивают для равномерного перемешивания компонентов и оставляют при температуре 22-24°С. Реакцию сопровождают контролем эритроцитов на самоагглютинацию. Для этого к 0,2 мл физраствора добавляют 0,2 мл 1% взвеси эритроцитов (чаще используют 4 пробирки или лунки планшета), перемешивают и оставляют при указанной температуре. Агглютинации эритроцитов в данном случае быть не должно. Оценивают результаты РГА через 30 минут по бальной системе в крестах:
Четыре креста (++++) - агглютинированные эритроциты оседают на дно лунки в виде перевернутого зонтика с неровными зубчатыми краями.
Три креста (+++) - зонтик агглютинированных эритроцитов меньше и в его центре находится диск неагглютинированных эритроцитов.
Два креста (++) - зонтик хорошо выражен, но центральный диск неагглютинированных эритроцитов увеличен и четко различим, при наклоне планшета не стекает.
Один крест (+) - незначительная агглютинация эритроцитов по краям диска, который при наклоне планшета стекает.
Отрицательная реакция (-) - отсутствует агглютинация эритроцитов.
За гемагглютинирующий титр вируса или одну гемагглютинирующую единицу (1 ГАЕ) принимают наибольшее разведение вируса, при котором наблюдается агглютинация эритроцитов не менее чем на два креста. Например: четко выраженная гемагглютинация получена в разведении 1:512, т. е. 0,2 мл выделенного вируса в разведении 1:512 содержат 1 ГАЕ. Допустима постановка РГА (как и РЗГА) в планшетах для биохимических исследований с внесением всех компонентов в объеме 0,05 мл каждый.
Реакция задержки (торможения) гемагглютинации (РЗГА) является серологическим методом идентификации вновь выделенных штаммов вирусов, обладающих гемагглютинирующей активностью и определения их антигенного родства с эталонными штаммами. Но чаще она применяется для ретроспективной диагностики, установления напряженности постинфекционного и поствакцинального иммунитета посредством количественного определения специфических антител в сыворотке крови цыплят и взрослых птиц. Методика остановки РЗГА в целях индентификации выделенного вируса ССЯ-76 и серологической диагностики заболевания отличаются незначительно. Для идентификации возбудителя используется заведомо положительная сыворотка, содержащая антигемагглютинины к вирусу ССЯ-76 в известном титре. При проведении диагностических исследований, направленных на выявление специфических антител, используют стандартный инактивированный антиген вируса ССЯ-76.
Для идентификации выделенного вируса первоначально определяют титр его гемагглютинирующей активности в РГА, подбирают рабочее разведение вируса, равное 4 ГАЕ (методика приводится ниже), после чего к 4 ГАЕ вируса в 0,2 мл физиологического раствора добавляют 0,2 мл положительной к вирусу ССЯ-76 сыворотки в разведении, заведомо нейтрализующем взятое количество вируса. После контакта вируса с сывороткой в течение 30 мин. при комнатной температуре добавляют 0,4 мл 1% взвеси эритроцитов и через 30 минут учитывают результат. Задержка гемагглютинации указывает на гомологичность вида вируса и сыворотки, т.е. будет являться подтверждением того, что выделен вирус ССЯ-76. Отсутствие задержки гемагглютинации свидетельствует о том, что выделен гемагглютинирующий возбудитель, не являющийся вирусом ССЯ-76.
Реакция задержки гемагглютинации для серологический диагностики ССЯ-76 ставится в два этапа.
На первом этапе проводится титрование стандартного инактивированного антигена вируса ССЯ-76 по гемагглютинирующей активности в РГА, готовится и контролируется его рабочее разведение. На втором этапе ставится собственно РЗГА.
В РЗГА используют рабочее разведение антигена, равное 4 ГАЕ. Для приготовления рабочего разведения антигена проводят титрование стандартного инактивированного антигена вируса ССЯ-76 в РГА. В результате этого устанавливают активность антигена, равную 1 ГАЕ, после чего готовят рабочее разведение, равное 4 ГАЕ. Для этого антиген с известной гемагглютинирующей активностью разводят стерильным физиологическим раствором во столько раз, сколько получают от деления на 4 числа, соответствующего его гемагглютинирующему титру. Так в нашем примере гемагглютинирующий титр антигена (1 ГАЕ), определенный в РГА, равен 1:512. Чтоб получить рабочее разведение антигена, его необходимо разбавить в 128 раз - (512:4 = 128). Следовательно, для приготовления рабочего разведения антигена активностью в РГА 1:512, содержащего 4 ГАЕ в 0,2 мл, нужно взять 1 мл исходного антигена и добавить 127 мл физраствора.
Перед постановкой основной реакции проверяют правильность выбранной рабочей дозы антигена. Для этого в пять лунок плексигласового планшета, начиная со второй, вносят по 0,2 мл стерильного физиологического раствора. Затем в первую и вторую лунку вносят по 0,2 мл антигена в рабочем разведении. Из второй лунки пипеткой берут 0,2 мл жидкости и переносят в третью и т.д., приготавливая таким образом двукратные разведения антигена. После этого в каждую лунку добавляют по 0,2 мл 1% взвеси эритроцитов кур, перемешивают, аккуратно покачивая планшет, и оставляют при комнатной температуре на 30 минут. При правильном выборе рабочей дозы антигена (4 ГАЕ) в 1, 2 и 3 лунках, содержащих соответственно 4, 2 и 1 ГАЕ, должна наблюдаться интенсивная агглютинация эритроцитов. В четвертой и пятой лунках агглютинация должна быть не более чем на один крест. Если результаты контроля будут иными, необходимо повторно провести титрацию стандартного антигена и заново приготовить его рабочее разведение.
Реакцию задержки гемагглютинации ставят в плексигласовых пластинках или пробирках. При этом в каждую лунку пластины или пробирку вносят по 0,2 мл физиологического раствора, затем в первую лунку (пробирку) каждого ряда вносят по 0,2 мл исследуемой сыворотки и с помощью пипетки готовят двукратные последовательные разведения от 1:2 до 1:4096. После этого во все лунки (пробирки) вносят по 0,2 мл антигена в рабочем разведении, пластины (штативы) встряхивают до равномерного перемешивания компонентов и оставляют при комнатной температуре на 30 мин для осуществления контакта антигена с антителами сыворотки. По истечении указанного срока в каждую лунку пластины (пробирку) вносят по 0,4 мл однопроцентной взвеси эритроцитов кур, компоненты перемешивают и оставляют при комнатной температуры на 30 мин. Если в исследуемых сыворотках крови содержатся специфические антигемагглютинины к вирусу ССЯ-76, то РЗГА считается положительной и будет проявляться отсутствием гемагглютинации в определенных лунках, в зависимости от титра антител. Титром сыворотки считается ее наибольшее разведение, при котором отсутствует агглютинация эритроцитов. Постановка РЗГА должна сопровождаться контролями:
0,2 мл 1% взвеси эритроцитов кур + 0,2 мл физиологического раствора (агглютинации эритроцитов быть не должно);
0,2 мл специфической положительной к вирусу ССЯ-76 сыворотки крови + 0,2 мл антигена в рабочем разведении + 0,4 мл 1% взвеси эритроцитов кур (гемагглютинации быть не должно);
0,2 мл нормальной отрицательной к вирусу ССЯ-76 сыворотки крови кур + 0,2 мл антигена в рабочем разведении + 0,4 мл 1% взвеси эритроцитов кур (должна быть четко выраженная гемагглютинация);
0,2 мл исследуемой сыворотки крови (экстракта яиц) + 0,2 мл 10% взвеси эритроцитов кур (гемагглютинации быть не должно).
Учет РЗГА следует начинать с учета контролей. Только при удовлетворительных результатах контрольной реакции можно учитывать результаты реакции с испытуемыми сыворотками. Диагностическим положительным титром антигемагглютининов к вирусу ССЯ-76 является титр 1:16 и выше. Отрицательные результаты исследования в РЗГА 15-10 проб сывороток крови или экстрактов желтков яиц, взятые через 2-3 недели после спада яйценоскости, позволяют исключить ССЯ-76 как одну из ведущих причин снижения яичной продуктивности.
Диагностические исследования на ССЯ-76 наиболее достоверны, если исследовать парные сыворотки крови, полученные от кур до начала заболевания (спада яйценоскости), в период и после восстановления яйценоскости, ориентировочно взятые от кур-несушек в возрасте 160-180, 200-140 дней, после 300-дневного возраста и при окончании эксплуатации несушек в связи с возрастом.
Реакция иммунофлуоресценции (прямой метод флуоресцирующих антител, МФА) используется для идентификации вируса, выделенного на культуре клеток или эмбрионов птиц. Окрашивание препаратов меченой ФИТЦ сывороткой (конъюгат антител с флюоресцеина изоцианатом), специфичной к вирусу ССЯ-76 и их исследование в МФА проводят по общепринятой методике.
При выделении вируса в зараженных развивающихся эмбрионах птиц для идентификации возбудителя в МФА используют препараты из хориоаллантоисной оболочки. Выявление специфических гранулярных внутриядерных включений антигена вируса ССЯ-76 в инфицированных клетках свидетельствует об идентификации выделенного возбудителя.
Метод иммуноферментного анализа (ИФА) основан на выявлении комплекса антиген-антитело в результате взаимодействия специфических антител с антивидовым пероксидазным конъюгатом, способным вызвать разложение субстрата с образованием цветного продукта ферментной реакции. Для постановки реакции используют «Набор для диагностики ССЯ-76 иммуноферментным методом» (ВНИВИП), состоящий из иммуноспецифических и неспецифических компонентов. Исследование проб испытуемых сывороток кур можно проводить двумя способами: без раститровки сывороток и с раститровкой. Если исследование проб испытуемых сывороток крови проводится без раститровки, то это дает возможность провести качественную оценку результатов в реакции ИФА по принципу - положительная реакция (выявлены специфические антитела к вирусу ССЯ-76) или отрицательная реакция (специфических антител нет). Если исследование проводилось с раститровкой, то за титр сыворотки принимают максимальное ее разведение, при котором еще наблюдаются различия в окраске содержимого лунок с пробами испытуемых сывороток по сравнению с лунками отрицательного контроля (отрицательной сывороткой). Желательно исследовать парные сыворотки крови, полученные от кур до начала заболевания (спада яйценоскости) в период болезни и после восстановления яйценоскости.
Электронномикроскопическую диагностику ССЯ-76 проводят исследованием вируссодержащего материала с использованием общепринятого метода негативного контрастирования, который при концентрации вируса в материале 10 6 /мл позволяет в течение 30 минут подготовить препараты к просмотру в электронном микроскопе. При более малом содержании вируса проводят его концентрирование одним из общепринятых методов, либо применяют метод иммунной электронной микроскопии с использованием гомологичной к вирусу ССЯ-76 сыворотки крови кур, который при незначительном увеличении сроков обработки материала позволяет одновременно проводить серологическую идентификацию вируса.
Биопробу ставят на 5 птицах 120-130-дневного возраста. Исследуемый материал вводят интраназально или внутримышечно в объеме 0,3-0,5 мл каждой из пяти птиц. Такое же количество цыплят оставляют в группе незараженного контроля. Срок наблюдения - 30 дней. За положительную пробу принимают наличие у зараженных кур в сыворотке крови антигемагглютининов к вирусу ССЯ-76 в титре 1:16 и выше, а также выраженных отклонений в яичной продуктивности и качестве снесенного яйца. При патологоанатомическом вскрытии у зараженной птицы выявляют нарушения в развитии органов репродуктивного тракта. При необходимости проводят гистологические и электронномикроскопические исследования.
Лечение и профилактика. Профилактика ССЯ-76 базируется на строгом соблюдении зоогигиенических требований, общих ветеринарно-санитарных правил, условий содержания и кормления птиц, в сочетании со специфической профилактикой заболевания, основанной на применении вакцины.
Комплектовать родительское стадо необходимо за счет потомства, полученного из благополучных по ССЯ-76 птицехозяйств или из тех, где проводится специфическая профилактика болезни. Крайне нежелательно совместное содержание в одном помещении разновозрастной птицы и кур различных кроссов. Учитывая возможность заражения кур вирусом ССЯ-76 от уток и гусей, необходимо строгое территориальное разделение утко- и гусеферм от помещений, заселенных курами, и сокращение до минимума хозяйственных контактов между ними.
При возможности осложнения ССЯ-76 условно патогенной микрофлорой целесообразно давать птице в течение 5-7 дней антибиотики и нитрофурановые препараты. Больным и подозреваемым в заболевании птицам увеличивают количество даваемых витаминов А, Д3, Е, В. Повышают в 2-3 раза количество кальция в рационе, вводят в комбикорм до 0,3% бикарбоната натрия (питьевой соды).
Для специфической профилактики ССЯ-76 используется инактивированная вакцина, которая вводится птице внутримышечно или подкожно в возрасте 90-120 дней, желательно не позднее, чем за 30 дней до начала яйцекладки. Иммунитет формируется через 14 дней, достигает максимума к 30 дню. Имеются 1-, 2-, 3- и 4- и более валентные вакцины, в различных сочетаниях позволяющие одновременно вакцинировать птиц от ССЯ-76, ныокаслской болезни, инфекционного бронхита, болезни Гамборо, синдрома «большой головы» - пневмовирусной инфекции, реовирусной инфекции, респираторного микоплазмоза, используемые в зависимости от эпизоотологической ситуации в птицехозяйстве. Через 21-28 дней необходимо определять поствакцинальный иммунитет и при необходимости срочно ревакцинировать птицу.
Синдром снижения яйценоскости-76 (ССЯ-76) - Egg drop Syndrome-76 (EDS-76) - вирусная болезнь кур, характеризующаяся снижением яичной продуктивности, изменением формы яиц, качества и пигментации скорлупы, нарушением структуры белка.
Историческая справка, распространение, экономический ущерб. В 1975 г. в ряде стран Западной Европы (Голландии, Англии, Северной Ирландии, а несколько позднее в Италии, Франции, Швеции, Дании, Венгрии и других странах) появилась новая болезнь кур, характеризующаяся снижением яичной продуктивности, снесением бесскорлупных яиц или яиц с истонченной депигментированной скорлупой. Болезнь особенно быстро распространялась в зонах с высокой концентрацией птицеводства.
В силу характерных признаков, свойственных данной болезни, в литературе она получила название «синдром снижения яйценоскости-76» - Egg Drop Syndrome-76 (EDS-76). Впервые ее описал J. Van Ecke и соавт., 1976.
Быстро распространившись, она была зарегистрирована в Японии, Индии, Австралии, Нигерии, Бразилии, Мексике, СССР, Тайване.
Гипотеза возникновения ССЯ-76 предложена рядом ученых, которые возбудителем болезни считают утиный вирус, не вызывающий у естественных «хозяев» патологии. Куриные стада были инфицированы вирусом в результате применения против болезни Марека вакцины из штамма «Риспенс», приготовленной с использованием культуры клеток утиных фибробластов, контаминированных аденовирусом. Вирус быстро адаптировался к новому для него «хозяину» и проявил свои патогенные свойства. Происхождение возбудителя ССЯ-76 от уток авторы объясняют тем, что заболевание впервые появилось в Голландии - стране интенсивного утководства.
По статистическим данным в 1993 г. в России было впервые диагностировано ССЯ-76 у кур и были проведены лечебно-профилактические мероприятия в следующих областях: Ленинградской, Московской, Свердловской, Челябинской, Омской - на поголовье кур 2 140 774. Из них наибольший процент больных кур приходился на Ленинградскую область (67,1%), Челябинскую область (15,9%), Омскую область (12,6%).
В 1994 г. произошло дальнейшее распространение ССЯ-76 - в Московской, Ленинградской, Калининской, Владимирской, Вологодской, Тульской, Ярославской, Свердловской, Челябинской, Нижегородской, Пермской, Омской, Ульяновской, Оренбургской, Смоленской, Орловской, Мурманской областях, в том числе в ряде автономных республик, завакцинировано всего 18 452 923 голов кур. Наибольший процент больных и вирусоносителей приходился на Московскую (21,1%), Ленинградскую (17,1%), Омскую (15,8%), Ульяновскую (10%), Нижегородскую (8,75%) области.
В 1995 г. заболевание было зарегистрировано в вышеперечисленных областях, а также в Брянской, Псковской, Архангельской, Рязанской, Калужской, Волгоградской, Курской, Белгородской, Новосибирской областях, Красноярском крае и. в ряде автономных республик, завакцинировано 52 270 669 голов кур. Из них наибольший процент приходился на Красноярский край (15,5%), Московскую (10,9%), Пермскую (6,2%), Ульяновскую (4,2%), Нижегородскую (3,6%), Новосибирскую (3%) области.
Синдром снижения яйценоскости-76 наносит значительный экономический ущерб. По данным зарубежных исследователей ущерб складывается из недополучения в среднем на курицу-несушку 15 яиц (от племенных несушек выбраковывается в среднем до 50 яиц), снесения до 15% бесскорлупного яйца, до 12% яиц с кровяным кольцом, снижения на 7% выводимости цыплят и низкой их жизнеспособности, что приводит к повышенному до 10% отходу цыплят в период до двухнедельного возраста. Ущерб от ССЯ-76 усугубляется затратами на ограничительные мероприятия, особенно касающиеся племенных хозяйств.
Возбудитель. Заболевание вызывается ДНК-содержащим вирусом из семейства Adenoviridae.
Вирус ССЯ-76 был впервые выделен в 1976 г. J. Me. Ferran в Северной Ирландии. В настоящее время этот штамм возбудителя известен под номером «127». Почти одновременно в Англии Bexandale выделил из лейкоцитов больных кур аналогичный вирус, названный «ВС-14». Позднее в Венгрии был выделен вирус ССЯ-76, получивший название «ВВ/78».
Возбудитель инфекции - утиный аденовирус, обладающий, в отличие от известных серотипов птичьих аденовирусов, способностью агглютинировать эритроциты кур, уток, гусей, индеек, а мексиканский вирус EDS-76 (штамм НО-1) - эритроциты человека, павлинов и голубей.
Морфологически вирион представляет собой частицу около 80 нм в диаметре, с нитевидными отростками длиной 25 нм и диаметром 2 нм, оканчивающимися булавовидными утолщениями.
Вирус хорошо репродуцируется в культурах ткани печени и почек куриных и утиных эмбрионов, в культуре фибробластов и в аллантоисной полости развивающихся утиных эмбрионов. При репродукции в культуре клеток вирус вызывает цитопатический эффект (ЦПЭ) и образует внутриядерные включения, характерные для вирусов птиц. Установлено, что утиные эмбрионы и культуры клеток, приготовленные из них, являются более адекватной моделью для вируса, чем культуры клеток куриных эмбрионов. Это свойство успешно используется для выделения вируса, получения вируссодержащего материала в высоких титрах при производстве диагностикумов и вакцин.
Возбудитель ССЯ-76 сравнительно устойчив к эфиру, хлороформу, действию температурных факторов. При нагревании вируса до 56°С в течение 30 мин инфекционная активность
снижается не более, чем на 50%. Нагревание до 70% вызывает потерю инфекционной и гемагглютинирующей активности через 10 мин. В замороженном состоянии при -25°С вирус сохраняет жизнеспособность более чем 3 года. Вирус относительно стабилен при рН среды 6,0-8,0.
Эпизоотология. К заболеванию восприимчивы куры-несушки всех пород с максимальным проявлением болезни в период наивысшей яйценоскости (200-240 дней), но возможно поражение птицы в любой период продуктивного цикла. Болезнь быстро распространяется при напольном содержании птицы. Более восприимчивы к заболеванию куры-несушки высокопродуктивных кроссов, в том числе «Хайссекс браун», «Ломан браун», «Иса браун». Считается, что птица мясных пород более восприимчива к заболеванию, чем птица яичная. В естественных условиях вирус ССЯ-76 широко распространен среди домашних и диких уток, в то же время является апатогенным для них, не вызывая болезни; но при этом они могут быть источником инфекции для кур. Несмотря на невысокую контагиозность заболевания, существует опасность заноса возбудителя на территорию хозяйства дикими птицами: голубями, воробьями.
По данным отдельных авторов бройлеры могут быть потенциальным источником инфекции. Основной путь распространения возбудителя - трансовариальная вертикальная передача. При появлении первых клинических признаков болезни отмечается горизонтальное распространение возбудителя.
Особенно интенсивно инфицируются яйца в период виремии, которая по времени совпадает с уменьшением яйцекладки. В этот же период вирус выделяется с фекалиями, фарингиальной и трахеальной слизью. Не исключено выделение его со спермой петухов. Возможно также распространение вируса при вакцинации против других инфекций.
Для экспериментального воспроизведения инфекции используют оральный интраконъюнктивальный и интраклоакальный способы введения, а также совместное содержание больных и здоровых птиц.
Специфических предрасполагающих факторов возникновения инфекции, кроме возрастного, не установлено. Эпизоотологической особенностью синдрома-76 является способность вируса не проявлять себя в организме до достижения птицей половой зрелости. Причиной активации вируса является стресс, вызванный началом яйцекладки. После 40-недельного возраста птица вирус не выделяет, но в крови содержатся специфические антитела.
У кур, выращенных из цыплят, выведенных из инфицированных яиц и заразившихся в первые дни жизни, спада яйценоскости не происходит, хотя она может не достигнуть прогнозируемого уровня. Такие птицы в течение всего периода выращивания остаются вирусоносителями. Вирус реактивируется и выделяется лишь с наступлением яйцекладки в возрасте 22-26 недель. Снижение яйценоскости отмечают только у кур, серонегативных в течение всего периода выращивания, то есть чем больше отрицательно серологически реагирующих кур в инфицированном стаде, тем резче проявляется синдром снижения яйценоскости.
Патогенез. В период латентной инфекции вирус персистирует в кишечнике. Виремия является одной из стадий аденовирусной инфекции. Считают, что реактивация вируса происходит вследствие изменения гормонального профиля в начале яйцекладки, которую рассматривают как стрессовый фактор. Длительность периода персистенции и выделения вируса имеет обратную зависимость по отношению к возрасту заражения кур. Чем раньше они инфицируются, тем длительнее эти периоды.
В период виремии вирусные частицы обнаруживаются в эпителиальных клетках слизистой оболочки яйцеводов и в других органах. По-видимому, вирус оказывает непосредственное действие на железистый эпителий матки, что и обусловливает кладку бесскорлупных яиц или яиц с тонкой и хрупкой скорлупой.
Есть данные, свидетельствующие о том, что вирус нарушает «натриево-калиевый насос» железистых клеток слизистой оболочки матки. Так, у кур, несущих яйца с нарушенной скорлупой, концентрация натрия в содержимом матки значительно увеличена, а кальция, калия и магния - уменьшена по сравнению с интактными или инфицированными, но несущими яйца с нормальной скорлупой курами. Увеличение кислотности может приводить к растворению кальция и нарушению образования скорлупы.
Клинические признаки. Клиническая картина болезни выражена незначительно. Характерных симптомов нет. В отдельных случаях у больных кур отмечается диарея, некоторое угнетение, взъерошенность перьев, анемия, снижение поедаемости корма.
В пик заболевания наблюдается ослабленное дыхание, жидкий зеленоватого цвета помет в течение 1-2 недель. На поздних стадиях болезни отмечается синюшность сережек и гребня. Наиболее характерным типичным признаком болезни является снижение яичной продуктивности и получение неполноценного яйца. Яичная продуктивность снижается в среднем на 15-30%, а в отдельных неблагополучных стадах - до 50%. При этом снижение яйценоскости протекает в определенной закономерности - весь период спада составляют 6-7 недель, из них 4-5 недель приходится непосредственно на спад, а 2- 3 последующих недели - на восстановительный период. При клеточном содержании продуктивность кур восстанавливается почти полностью или остается на 1-3% ниже плановой, а при напольном содержании, как правило, на 7-10% не достигает первоначальной.
Изменение качества яйца, полученного в период болезни, проявляется в том, что больная птица в течение 6-8 недель несет яйцо без скорлупы или с полосчатыми шероховатыми образованиями на поверхности скорлупы. Значительно увеличивается количество «мраморного» яйца, возрастает процент боя и насечки яиц. Ухудшаются инкубационные качества яйца, при этом снижается оплодотворяемость яиц, выводимость и жизнеспособность цыплят.
Изменение качества скорлупы, так называемое «жировое яйцо», наиболее часто наблюдается у мясной птицы и у бурых несушек. У кур породы белый леггорн, «Хайсекс белый» изменению более подвержена белковая часть яйца, а не скорлупа. У этих пород кур белок становится водянистым, мутным. Вирус ССЯ-76 вызывает отек железистой ткани маточных ворсинок с последующей дегенерацией слизистого эпителия матки, что обусловливает недостаточную резорбцию кальция и приводит к ацидозу в результате снижения рН секретов слизистой оболочки матки и яйцепровода. Это, в свою очередь, вызывает нейтрализацию карбоната кальция, образуемого скорлупочной железой, что приводит к образованию бесскорлупных яиц, яиц с мягкой, истонченной, депигментированной скорлупой.
Падеж птицы при синдроме снижения яйценоскости-76 даже в пик болезни незначительный. Смертность среди взрослых несушек может составлять 3-5%, преимущественно за счет желточного перитонита и увеличенного количества расклевов.
Патологоанатомические изменения. Основные патоморфологические изменения при ССЯ-76 локализованы в органах репродуктивного тракта - яичнике, яйцеводе, матке.
При вскрытии павшей и вынужденно убитой взрослой птицы, пораженной вирусом ССЯ-76, во всех случаях отмечают малое количество созревающих и зрелых фолликулов в яичнике. Часто наблюдается атрофия яичников, наличие в них бугристых, деформированных и атрофированных фолликулов, заполненных массой творожистой консистенции серо-желтого или зеленоватого цвета. Встречаются фолликулы с гиперемией или кровоизлияниями в соединительнотканной капсуле. Яйцевод пораженных несушек, как правило, укорочен, стенка его истончена, в отдельных случаях с очагами гиперемии. С учетом локализации процесса и этиологии болезни некоторые авторы предлагают назвать ее «аденовирусным сальпингитом».
Во многих случаях на вскрытии отмечают изменение печени, которая увеличивается в размере, отечна, имеет дряблую консистенцию и желтовато-глинистую окраску. Имеет место изменение желчного пузыря, который увеличен, переполнен желчью водянистой консистенции, светло-зеленого цвета. Гипертрофированная печень и нарушение нормальной функции желчного пузыря приводят к общему расстройству пищеварения, что выражается в дряблости и неподвижности кишечника, наполненного пенистым зеленоватого цвета и водянистой консистенции непереваренным кормом.
Гистологические изменения. При гистологическом исследовании органов и тканей пораженной птицы выявляют основные изменения, преимущественно в органах репродуктивного тракта, а также в печени.
Так, в яичниках отмечаются лимфоидногистиоцитарные и мононуклеарные пролифераты, гиперемия, дистрофические, а на более поздних стадиях болезни и некротические изменения в эпителиальном слое отдельных фолликулов. В белковом отделе яйцевода также обнаруживаются очаги моноядерной лимфоидной инфильтрации, формирующееся периваскулярно в соединительнотканной перегородке складок слизистой оболочки и распространяющиеся на его железистую ткань. В матке имеют место отеки слизистой оболочки и очаговые лимфоидногистиоцитарные пролифераты. В печени обнаруживают гиперемию, наличие периваскулярных пролифератов, дистрофические изменения в гепатоцитах, чаще жирового характера.
Иммунитет. Штаммы вируса ССЯ-76 вызывают у зараженной птицы образование специфических антител - антигемаг-глютинирующих, преципитирующих и вируснейтрализирующих - на 7-14-й день после заражения.
Диагностика. Диагноз на ССЯ-76 устанавливают на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований.
Важное значение для постановки предварительного диагноза имеет оценка графиков яичной продуктивности птицы. Так как вирус ССЯ-76 провоцирует спад яйценоскости на 15-30% у птицы в возрасте 200-240 дней, то снижение продуктивности у кур-несушек в другие сроки, особенно после 300-дневного возраста, является причиной действия других факторов. Немаловажное значение при постановке диагноза имеет оценка качества яиц - их форма, цвет и качество скорлупы, качество белка.
Решающими при постановке диагноза на ССЯ-76 являются лабораторные методы.
1. Выявление специфических антител в сыворотке крови больных и подозрительных кур-несушек в реакции задержки гемагглютинации (РЗГА) и с помощью иммуноферментного анализа (ИФА).
Для исследования берут парные сыворотки крови, начиная с 160-180-дневного возраста в любом случае начала спада яйценоскости. В случае обнаружения антигемагглютинирующих антител в титрах 1:4 и выше делают вывод о персистенции возбудителя ССЯ-76.
2. Выделение вируса из патологического материала с последующей идентификацией его в РЗГА.
Выделение вируса из патологического материала наиболее целесообразно проводить в развивающихся 10-12 дневных утиных эмбрионах или в культуре клеток фибробластов, печени, почки утиных эмбрионов.
3. Дифференциальная диагностика. При дифференциальной диагностике ССЯ-76 исключают снижение яйценоскости, обусловленное вирусами CELO, инфекционного бронхита, ньюкаслской болезни и нарушениями условий содержания и кормления.
Специфическая профилактика. Для профилактики ССЯ-76 разработаны и внедрены в практику птицеводства моновалентные и ассоциированные формы вакцин на основе минеральных и масляных адъювантов. Птицу вакцинируют однократно внутримышечно в возрасте 100-110 дней.
Широкое распространение в настоящее время получили ассоциированные инактивированные вакцины против инфекционного бронхита, ИББ, ньюкаслской болезни и ССЯ-76.
Человек, разводящий кур на яйцо и мясо на своём участке, должен не только изучить правила их разведения и содержания, но и иметь понятие о заболеваниях, которые могут поразить его пернатых питомцев. И не только знать о них, но и уметь своевременно и правильно реагировать, чтоб не упустить опасных для жизни птицы, а также для здоровья человека, состояний. В данном материале рассматривается распространённое заболевание под названием синдром снижения яйценоскости-76.
Есть болезни домашней птицы, передающиеся от одного вида к другому без выраженных симптомов до тех пор, пока не обнаружится жертва, имеющая чувствительность к возбудителю заболевания.
Знаете ли вы? Куры впервые одомашнены около трёх тысяч лет назад на территории, где расположена современная Эфиопия.
Синдром снижения яйценоскости-76 (ССЯ-76) впервые обнаружен и описан в Нидерландах в 1976 году. Принято считать, что вирус переносят утки: домашние и дикие, сами они, однако, заболеванию не подвержены.
Тот факт, что в пробах сыворотки, полученной из куриной крови до указанного года, не обнаружено антител к возбудителю, считается доказательством того, что именно в данный период возникла эта болезнь.
Впоследствии штаммы вируса, идентичные исходному, штамму-127, выделялись в различных прогрессивных странах: Англии, Франции, Италии, Японии, Венгрии. Это означает, что обнаруженное заболевание стало распространяться по всему миру.
ССЯ-76, или аденовирусная болезнь (Egg drop Syndrome-76), характерна тем, что у кур-несушек за счёт поражения половой системы снижается яичная продуктивность, у яиц изменяется форма, ухудшается их качество, скорлупа фрагментарно депигментирована и размягчается или полностью отсутствует, нарушается структура белка.
Возбудителем данной патологии является ДНК-содержащий аденовирус (Adenoviridae), откуда и другое название заболевания. Данный микроорганизм не имеет принадлежности к известным типам аденовирусов пернатых и способен, в отличие от упомянутых, к склеиванию (агглютинации) эритроцитов многих, в том числе домашних, птиц.
Знаете ли вы? Курица не станет нестись в темноте, даже если для этого подошло время. Она дождётся наступления дня или включения освещения.
После того как курица перенесла данное заболевание, она обзаводится антителами, которые способна передавать потомству через яйца.
Микроорганизм проявляет чувствительность к формальдегиду, но его невозможно уничтожить:
При 50-градусной температуре он активен в течение 3 часов, при 56-градусной – один час, при 80-градусной – полчаса. Известно, что размножается возбудитель в клетках эпителия яйцевода и при этом нарушается формирование яичной скорлупы нормального качества.
Знаете ли вы? У однодневного цыплёнка имеется набор рефлексов и навыков, которые соответствуют набору у человеческого ребёнка трёхлетнего возраста.
У перенёсшей заболевание птицы после выздоровления могут наблюдаться:
Заболеть может курица любой породы и любого возраста, начиная с продуктивного, однако, «излюбленный» возраст для проявления вируса – пик куриной продуктивности: 25-35-недельный. Большую восприимчивость к нему проявляют куры племенных пород, а также несушки, относящиеся к мясному типу.
Проявления болезни тем ярче, чем более высокая продуктивность ожидается от особи в соответствии с её породными характеристиками.
Аденовирус, переданный трансовариально (через яйцо, снесённое заражённой несушкой), может бессимптомно пребывать в организме молодой птицы до поры, когда её организм испытает стресс, например, начало яйцекладки. В подходящий для него момент он активируется, снижая яйценоскость курицы. Этот способ передачи называется вертикальным.
Примечательно, что, выведенная из заражённого яйца или инфицированная возбудителем ССЯ-76 в первые дни жизни курица не будет демонстрировать ярких проявлений синдрома на пике продуктивности, однако и высокой яйценоскости от неё ждать не приходится.
Сохраняется также возможность горизонтального заражения:
Переносчиками возбудителя ССЯ-76 являются заражённые, а также переболевшие куры, утки и гуси, причём как домашние, так и дикие, а также иные водоплавающие. Посредством заражённых фекалий дикие птицы могут переносить болезнь на огромные расстояния.
Важно! В случае когда птица содержится скученно, в тесном контакте, распространение вируса значительно ускоряется и может произойти инфицирование всего стада за 1-14 дней. И напротив, изолированные друг от друга перегородками несушки способны в течение долгого времени оставаться здоровыми, даже находясь вблизи инфицированной особи.
ССЯ-76 приносит значительный экономический ущерб как частным фермерским, так и большим промышленным хозяйствам. За время болезни выбраковка от одной несушки составляет 10-30 яиц, а у племенных птиц она доходит до 50. Это означает 17-25%-й ущерб.
На восстановление продуктивности одной особи уходит от 4 до 6 недель, если она содержится в клетке. У кур, содержащихся на полу и контактирующих с другими особями и их биологическим материалом, яйценоскость может так и не восстановиться до первоначального уровня на 6-12%.
Что касается инкубационных яиц, снесённых заражёнными особями, многие из них просто непригодны для выведения молодняка из-за слишком хрупкой скорлупы. Кроме того что выбраковывается большой процент уже на начальном этапе, выводимость птенцов снижается. Понижен также уровень их выживаемости в первые дни после вылупления.
Хоть в наше время о данном заболевании имеется гораздо больше информации, а также накоплено достаточно опыта борьбы в сравнении с 1976 годом, некоторые вопросы до сих пор спорны и не имеют однозначного ответа.
Важно! Синдром имеет широкое распространение в тех странах, где используются высокоразвитые промышленные технологии птицеводства, и наибольший ущерб наносит племенным хозяйствам.
До начала продуктивного возраста у инфицированной особи возбудитель пребывает в кишечнике и никак себя не проявляет. Когда приходит время и гормональный фон курицы изменяется для обеспечения яйценоскости, вирус активируется и наступает этап виремии, то есть циркуляции вируса в организме посредством кровотока.
Достигая эпителия слизистой оболочки яйцевода, вирус способствует нарушению баланса минералов: натрия, калия, магния, кальция и прочих, вследствие чего курица несёт яйца со слишком тонкой, деформированной, а то и вовсе отсутствующей скорлупой.
Знаете ли вы? Петух в курином стаде помимо репродуктивной роли выполняет ряд важных социальных и административных функций: контроль над режимом дня, предотвращение конфликтов, защиту от опасности, даже если противник заведомо превосходит его в силе и размерах.
При всей серьёзности инфекции куры редко демонстрируют какие-либо признаки заболевания.
Изредка, чаще в незначительной форме, могут наблюдаться:
Основным же признаком и симптомом является резкое уменьшение продуктивности, несение тонких, деформированных яиц очень плохого качества. Белок у такого продукта водянистый и мутный. Цыплята, выведенные из этих яиц, имеют низкую жизнеспособность и в большом количестве погибают в первые дни своей жизни.
Симптомы могут варьироваться в зависимости от породы курицы:
Важно! Падёж не является характерным признаком данной болезни, его уровень редко бывает выше 5%. Причиной в основном является желточный перитонит.
Для того чтобы поставить предварительный диагноз и вести последующий учёт, следует разработать графики, демонстрирующие развитие яичной продуктивности с учётом того, что, из-за аденовируса снижение яйценоскости наступает у несушки 200-240-дневного возраста.
В случае падения продуктивности у особи старше 300-дневного возраста причиной является, скорее всего, какой-то другой фактор.
В любом случае прежде чем поставить диагноз «синдром снижения яйценоскости-76», следует исключить:
Если вирус выявляется на промышленном предприятии, хозяйство переводят в разряд неблагополучных и накладывают соответствующие ограничения: меры по механической очистке и дезинфекции, вакцинация, выбраковка и тому подобное.
Обнаружение же курицы с подозрением на ССЯ-76 в частном курятнике является поводом пригласить ветеринарного врача, который произведёт осмотр и вакцинацию, даст рекомендации.
Диагноз «аденовирусная инфекция» ставят на основании исследований:
Для анализа в лаборатории исследуют:
Предпочтительно проводить исследования в первые дни заболевания (3-5 дней), и использовать материал от птицы, умершей или забитой не более 2 часов назад.
Кровь для выделения и исследования её сыворотки целесообразно забирать у особей следующих групп (15-20 проб от каждой):
Знаете ли вы? У кур имеется собственный «язык», способный с помощью звука передать другим особям около 30 различных сигналов.Имеется даже «материнский» язык, которым наседка общается с потомством. Более того, ещё не вылупившийся цыплёнок за несколько дней до этого события общается с наседкой сквозь скорлупу, используя для этого до десяти различных сигналов.
Что касается яиц, то желательно исследовать именно некондиционные образцы с нарушением структуры оболочки и/или содержимого.
Как при многих других вирусных заболеваниях, специфического лечения не существует. Рекомендуется сделать упор на полноценность рациона, его насыщенность незаменимыми аминокислотами, витаминами и минералами. Выработка антител начинается на 5-7 день заболевания и длится в течение 2-3 недель, после чего особь получает пожизненный иммунитет.
К необходимым мерам относится обязательная изоляция первых заболевших несушек от остального стада, особенно если практикуется напольное содержание. При этом необходимо наблюдать за остальной птицей на предмет обнаружения симптомов.
Если характер заболевания не единичный, необходимы карантинные мероприятия. Неблагополучная птица подлежит забою, взятый от неё биологический материал отправляется на анализ для лабораторного подтверждения диагноза.
Важно! Очень важно отследить начало заболевания и не запускать ситуацию: это может помочь избежать многих проблем, связанных с распространением вируса в курином стаде.
Эта мера может оказаться эффективной для пропуска фазы виремии – распространения вируса посредством кровотока по организму. Следовательно, птице возбудитель причинит меньше вреда, не будет присутствовать в выделениях организма, кроме того, эта мера позволяет улучшить качество яиц и продуктивность птицы.
Для профилактики такого неприятного заболевания, как синдром снижения яйценоскости-76 применяется вакцинация, которая предотвращает фазу виремии, что позволяет улучшить продуктивность и качество яичной скорлупы.
Вакцинируют 16-20-недельных особей, вводя препарат подкожно или внутримышечно, и через 2 недели у птицы развивается иммунитет продолжительностью в один год.
Для иммунизации применяются следующие вакцины:
Профилактические мероприятия основаны на выполнении ветеринарно-санитарных правил для того, чтобы предупредить внесение возбудителя из внешней среды. Для выведения цыплят используются яйца, взятые от несушек старше 40-недельного возраста, причём предварительно следует убедиться, что их анализы в норме.
Птицу, в чьей крови обнаружен возбудитель, забивают. Факт выявления вируса указывает на его наличие в хозяйстве. В этом случае нужно наблюдать за своим курятником и вовремя предпринимать необходимые меры.
Для снижения риска вспышки заболевания в вашем курятнике нужно:
Знаете ли вы?
Куры способны на эмоции: сочувствие, грусть. Кроме того, они обладают достаточным уровнем интеллекта, чтоб запомнить внешность около ста других существ, а также используют имеющийся опыт и информацию об окружающей обстановке, принимая решения.
5
раз уже
помогла
Синдром снижения яйценоскости кур, синдром литья яиц, ССЯ-76, «Синдром-76», аденовирусная болезнь кур (Egg drop syndrome - англ.) - вирусная болезнь, поражающая товарных и племенных кур-несушек, характеризуется снижением яйценоскости, размягчением или исчезновением скорлупы яйца, потерей окраски скорлупы у пород кур, несущих коричневые яйца.
Распространенность . Болезнь впервые описана Van Eck в 1976 г. В настоящее время ее регистрируют в Голландии, Англии, Северной Ирландии, Франции, Италии, ФРГ, Испании, Бельгии, Югославии, Дании, Венгрии, Швеции, Аргентине и США.
Экономический ущерб , причиняемый болезнью, обусловлен потерями, связанными со снижением яйценоскости. По данным J. Macpherson, в Англии ущерб составил 2,4 млн. фунтов стерлингов в год. Французские ученые отмечают, что у птиц, находящихся в клетках, продуктивность восстанавливается в течение 4-6 недель, а при содержании на полу она ниже на 8-10%. Потери яиц на птицу в неблагополучных стадах составляют 17,7%, что оценено в 116,9 пенса. Больная птица несет до 15% деформированных, со слабой скорлупой или без нее или депигментированных яиц. По данным Darbyshire (1980), количество яиц с пораженной скорлупой может достигать 38-40%. J. McFerran et al. (1978) отмечают, что потери продуктивности при этой болезни составляют в среднем 12 яиц на курицу.
Экономический ущерб связан также со снижением качества инкубационных яиц. Более 50 яиц от курицы-несушки непригодно для инкубации из-за хрупкости скорлупы. Помимо высокой выбраковки, отмечено также снижение уровня выводимости и жизнеспособности цыплят в первые дни жизни.
Возбудитель . Различными исследователями выделено несколько штаммов, идентичность которых подтверждена серологическими исследованиями. Штамм 127 изолирован в Северной Ирландии со слизистой оболочки носовой полости и глотки птиц. Вирус (ВС 14) выделен из лейкоцитов крови, серологически подтверждена его идентичность вирусу 127, выделенному из яйцеводов, фецес, носоглотки кур в пораженных стадах, обнаружены также антитела к этому агенту (W. Baxendale, 1977, 1978; J. McFerran et al., 1977, 1978). В экспериментальных условиях болезнь воспроизведена заражением кур-несушек и бройлеров-свибов и установлено, что изолированный вирус является этиологическим агентом (W. Baxendale, 1977; W. Baxendale et al., 1978; McCraken, J. McFerran, 1978).
Штамм Д61 выделен из клоаки несушки в Англии. В Венгрии получен штамм В 8/78, идентичный штамму 127, во Франции выделены 3 штамма. Вирус идентифицирован как аденовирус (Todd, McNulty, 1978), но не установлены группоспецифичные антигены с основными аденовирусами птиц методом гельдиффузии (W. Ba-xendale, 1977; J. McFerran et al., 1978). Однако некоторую степень перекрестных реакций с аденовирусами птиц наблюдали при использовании метода непрямой иммунофлуоресценции (W. Baxendale, 1978).
Вирус снижения яйценоскости не связан ни с одним из 11 серотипов аденовирусов птиц (J. McFerran et al., 1978) и отличается от других аденовирусов птиц способностью агглютинировать эритроциты кур (J. McFerran et al., 1977), уток и гусей (W. Baxendale, 1977).
Вирус ССЯ-76 размножается в высоких титрах в почках уток, печени эмбриона уток и фибробластах утиного эмбриона, хуже - в клетках печени цыплят и крайне низко в фибробластах куриного эмбриона. В клетках млекопитающих вирус не культивируется. Он реплицируется в ядрах клеток по способу, описанному для первой подгруппы аденовирусов. Электронно-микроскопическим изучением тонких срезов инфицированных клеток обнаружены вирусные частицы и связанные с ними тельца-включения как у аденовирусов человеческого типа, так и аденовирусов птиц.
Возбудитель устойчив к эфиру и рН в широком диапазоне. Инфекционные свойства его теряются в течение 30 мин при 60°С, инактивируется он также трипсином, мочевиной и пиридином. Это ДНК-содержащий вирус, не имеющий внешней оболочки, плотность в хлористом цезии 1,34; константа седиментации в сахарозе равна 940; диаметр вириона 75-80 нм, симметрия капсида кубическая.
V. Kraft et al. (1979) электронно-микроскопически изучали изолят 127. В градиенте CsCl наблюдали 3 линии. Две линии имели плотность 1,32 г/мл, которые не отделялись фракционированием и были ответственны за высокую гемагглютинирующую активность и инфекционность. Эти линии содержали частицы, морфологически типичные для аденовирусов. Третья линия (плотность 1,30 г/мл) состояла в основном из разрушенных частиц и показала заметный пик гемагглютинирующей активности.
Гемагглютинин вируса стабилен в течение 30 мин при 70°С, но более высокая температура вызывает ингибицию активности. Очищенный растворимый гемагглютинин содержит 2 полипептида молекулярным весом 65 000 и 67 000, состоит из палочковидных структур 25-30 нм длиной.
Вирус икосаэдральной формы, размеры частиц, структура капсида, число капсомеров типичны для аденовирусов (V. Kraft et al., 1979).
Эпизоотологические данные изучены недостаточно. Синдром снижения яйценоскости поражает кур-несушек всех пород в возрасте 25-35 недель. Наиболее восприимчивы мясные породы, дающие яйца коричневой окраски, а также племенная птица. Менее восприимчивы породы, несущие белые яйца. Предполагается, что вирус синдрома литья яиц утиного происхождения, но он непатогенен для них. Считается, что в Северной Ирландии куры заразились после применения вакцины против болезни Марека из штамма Риспенс, полученной на утиной культуре ткани в Нидерландах. В Ирландии и ФРГ болезнь с признаками ССЯ-76 наблюдали впервые у кур, импортированных из Нидерландов.
Болезнь воспроизводится при искусственном заражении птицы конъюнктивально и орально. Вирус распространяется вертикально, через яйцо. Ряд исследователей признают и горизонтальный путь передачи инфекции, придавая большое значение помету. Предполагается распространение вируса со спермой петухов.
Эпизоотологическая особенность синдрома снижения яйценоскости - способность вируса не проявлять себя в организме птиц до достижения ими половой зрелости. Причина активизации возбудителя - стрессовое воздействие на организм, обусловленное началом яйцекладки.
Патогенез изучен недостаточно. Известно только, что происходит нарушение механизма формирования яичной скорлупы. Наблюдают также атрофию яичников и кровоизлияния в них. В матке увеличивается кислотность, что может привести к растворению кальция и нарушению образования скорлупы. При экспериментальном заражении кур-несушек дефектные яйца появляются на 4-7-е сутки, содержание белка и кальция в крови не изменяется.
Клинические признаки, как правило, не проявляются. Однако могут наблюдаться взъерошенность перьев, анемия, диарея, состояние прострации, снижение активности во время яйцекладки. На поздних стадиях болезни может появиться синюшность сережек и гребешка у 10-70% птицы. Типичные признаки болезни: обесцвечивание скорлупы у яиц с коричневой окраской, появление яиц с тонкой скорлупой или без нее, снижение яйценоскости. Эти признаки сохраняются от 2-3 до 6-12 недель и характерны для кур мясных пород и коричневых кроссов. Для кур яичных пород свойственно также изменение и внутреннего качества яиц: белок становится водянистым и мутным.
Патологоанатомические изменения или отсутствуют, или наблюдается слабый катаральный энтерит, атрофия, отек и мононуклеарная инфильтрация клеток железистой ткани матки и яйцеводов.
Диагноз и дифференциальный диагноз . Диагноз основывается на данных клинических признаков, патологоанатомических изменений и серологического исследования. Наиболее надежный метод диагностики - реакция торможения гемагглютинации (РТГА). При исследовании парных сывороток через 15 дней и 2-3 недели после заражения отмечается нарастание титра антигемагглютининов до 1: 1280-1: 2560.
Синдром литья яиц необходимо дифференцировать от ньюкаслской болезни , инфекционного бронхита , кокцидиоза , гельминтозов, отравлений пестицидами, фунгицидами, микотоксинами и различных факторов незаразной этиологии, вызывающих снижение яйценоскости (условия содержания, качество кормов, сбалансированность рациона и др.).
Лечение не разработано. Для поддержания оптимального уровня выводимости и жизнеспособности потомства рекомендуется использовать полноценные рационы, особенно в отношении незаменимых аминокислот, витаминов и микроэлементов.
Иммунитет и средства специфической профилактики . У естественно переболевшей птицы образуется напряженный иммунитет. Через 7 дней после инфицирования обнаруживаются вируснейтрализующие, антигемагглютинирующие и преципитирующие антитела, связанные с иммуноглобулином IgG. Цыплята, выведенные из яиц инфицированных кур, сохраняют материнские антитела, период полураспада которых составляет 3 дня. Пассивные антитела обеспечивают устойчивость цыплят к заражению в первые 4 недели жизни.
Для специфической профилактики используют масляную формолвакцину из штамма ВС 14, выращенного на культуре клеток эмбриона уток. Вводят вакцину однократно внутримышечно или подкожно в дозе 0,5 мл (1000 ГАЕ), начиная с 18-недельного возраста.
Вакцина от ССЯ-76 испытана во Франции, Нидерландах, Великобритании, Бельгии и Люксембурге, Аргентине. После прививки не наблюдается фаза виремии и связанная с ней экскреция вируса, улучшается яйценоскость и качество скорлупы. Иммунитет образуется через 15 дней, максимально антигемагглютинины накапливаются через 30 дней. Титр антител начинает снижаться через 12-16 недель после прививки. Через 40-50 недель антитела не выявляются.
Вакцинация рассматривается как временная мера в связи с опасностью распространения вируса и адаптации его к курам. В Югославии (М. Krecov et al., 1980) с положительным результатом испытана вакцина, инактивированная 13-пропиолактоном и адсорбированная гидроокисью алюминия, изготовленная из вируса штамма 127.
Профилактика и меры борьбы . Для инкубирования рекомендуется использовать яйца от кур старше 40-недельного возраста, дающих отрицательные результаты в серологических реакциях. В Англии, Северной Ирландии и ФРГ радикальной мерой борьбы и профилактики синдрома снижения яйценоскости считается убой птицы, положительно реагирующей в серологических реакциях, с тем, чтобы предотвратить вертикальный путь передачи возбудителя через яйцо. Допускается применять инактивированную вакцину.
